發(fā)布日期：2018-01-31
人EGFR突變基因檢測(cè)目前是表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑（EGFR-TKIs）治療的重要檢測(cè)靶點(diǎn)。隨著核酸檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，相關(guān)突變基因檢測(cè)越來(lái)越受到臨床專家和行業(yè)研究人員關(guān)注。不同于目前臨床常規(guī)成熟且推薦的檢測(cè)技術(shù)，新的檢測(cè)技術(shù)如何定位，臨床個(gè)體化應(yīng)用與臨床個(gè)體化研究?jī)烧叽嬖诘牟町惾绾谓鉀Q，臨床轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究如何有效轉(zhuǎn)化為臨床應(yīng)用，這些人EGFR突變基因檢測(cè)試劑申報(bào)過(guò)程中的共性問(wèn)題，都將是今后注冊(cè)審評(píng)關(guān)注重點(diǎn)。
1.產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中預(yù)期用途的表述
目前該類產(chǎn)品申報(bào)說(shuō)明書(shū)中存在預(yù)期用途指向不明確、表述不清晰等問(wèn)題。申請(qǐng)人需規(guī)范預(yù)期用途表述形式，結(jié)合該類產(chǎn)品臨床評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)與腫瘤個(gè)體化診療藥物聯(lián)合治療情況客觀描述產(chǎn)品預(yù)期用途。依據(jù)《體外診斷試劑產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)指導(dǎo)原則》要求，預(yù)期用途應(yīng)規(guī)范EGFR不同突變基因型別表達(dá)形式，明確產(chǎn)品外顯子、突變位點(diǎn)、cosmic代碼等信息。
申請(qǐng)人需依據(jù)自身完成的藥物診療個(gè)體化伴隨檢測(cè)研究工作，注意寫(xiě)明申報(bào)產(chǎn)品與個(gè)體化腫瘤藥物聯(lián)合臨床研究相關(guān)信息。介紹EGFR突變基因檢測(cè)的臨床背景，包括檢測(cè)相關(guān)適用人群特征、腫瘤組織類型、適用樣本類型、待測(cè)靶基因序列特征及選擇依據(jù)，靶基因及其表達(dá)蛋白在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中可能起到的作用，相關(guān)藥物或其他治療技術(shù)及其作用機(jī)理、與待測(cè)突變位點(diǎn)可能存在的關(guān)系等。
2.臨床研究相關(guān)問(wèn)題
研究表明，EGFR突變基因人群之間存在種族差異。亞裔人群中非小細(xì)胞肺癌患者EGFR突變基因陽(yáng)性率明顯高于高加索人群，但目前我國(guó)人群腫瘤突變基因數(shù)據(jù)庫(kù)缺乏，申請(qǐng)人進(jìn)行該試劑注冊(cè)申報(bào)前均需完成我國(guó)境內(nèi)臨床研究資料，滿足《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》要求，且需提供EGFR基因型與腫瘤個(gè)體化治療臨床意義相關(guān)研究資料。非小細(xì)胞肺癌人群中，如申報(bào)產(chǎn)品部分可檢測(cè)基因型未發(fā)現(xiàn)存在該類突變基因陽(yáng)性結(jié)果，可能與該部分突變基因在我國(guó)人群突變頻率較低或總樣本人群選擇存在偏倚有關(guān)。針對(duì)該類問(wèn)題，建議申請(qǐng)人擴(kuò)大臨床樣本人群或根據(jù)不同突變基因突變頻率特點(diǎn)，增加不同地域的臨床研究機(jī)構(gòu)，提高這部分突變基因陽(yáng)性檢出率。
3.關(guān)于檢測(cè)人外周血樣本相關(guān)問(wèn)題
申報(bào)產(chǎn)品中最常見(jiàn)的樣本類型為中性福爾馬林固定石蠟包埋病理組織（病理），且獲取腫瘤基因相關(guān)信息的主要來(lái)源仍是腫瘤病理組織樣本。研究結(jié)果表明，隨著腫瘤細(xì)胞的凋亡，腫瘤游離DNA（ctDNA）片段釋放到人體血液循環(huán)中，通過(guò)對(duì)外周血腫瘤游離DNA的檢測(cè)解讀，也可以較好地了解腫瘤病情的發(fā)展情況以及尋找適合的治療方案；尤其對(duì)于那些無(wú)法通過(guò)手術(shù)取得腫瘤組織或希望在治療后對(duì)病情進(jìn)行跟蹤隨訪的人群，是一種理想和有效的檢測(cè)手段。但由于血液游離DNA含量及變異情況會(huì)隨著腫瘤病情的發(fā)展、轉(zhuǎn)移性腫瘤的發(fā)生以及用藥治療情況發(fā)生實(shí)時(shí)的變化，外周血檢測(cè)EGFR突變基因檢測(cè)結(jié)果存在一定的不確定性。兩種樣本在用于人EGFR-TIK治療效果也存在差異。
鑒于上述原因，人EGFR突變基因檢測(cè)試劑如適用于外周血樣本檢測(cè)人群，預(yù)期用途應(yīng)限定為晚期NSCLC患者，且作為不能獲取NSCLC組織樣本時(shí)的補(bǔ)充手段。鑒于病理組織樣本和外周血樣本中EGFR突變基因比例不同，申報(bào)產(chǎn)品需分別對(duì)檢測(cè)外周血樣本和病例組織樣本進(jìn)行最低檢出限的研究。
4.關(guān)于適用樣本采集儲(chǔ)存相關(guān)問(wèn)題
病理組織樣本需詳細(xì)介紹組織學(xué)樣本類型，包括樣本來(lái)源及取材要求、組織標(biāo)本采集厚度、樣本處理方式（如組織樣本的固定及包埋方式）、腫瘤細(xì)胞比例等。在對(duì)核酸序列進(jìn)行檢測(cè)前，需對(duì)用于腫瘤組織突變基因檢測(cè)的標(biāo)本進(jìn)行評(píng)估，并富集存在EGFR突變基因的腫瘤細(xì)胞用于核酸提取。腫瘤細(xì)胞所占比例需達(dá)到所用檢測(cè)方法的要求。
外周血采集后，需通過(guò)驗(yàn)證試驗(yàn)規(guī)定外周血存放條件以及存放時(shí)限及溫度設(shè)置等，包括采用加入抗核酸降解的采血管要求。樣本采集管或保存管中所用的防腐劑、抗凝劑、保護(hù)劑等輔助成分不應(yīng)對(duì)基因序列擴(kuò)增產(chǎn)生干擾。血液通常需要先進(jìn)行抗凝保存，應(yīng)關(guān)注抗凝劑的選擇。申請(qǐng)人需對(duì)抗凝劑、防腐劑、保護(hù)劑等成分進(jìn)行驗(yàn)證。
因外周血中ctDNA含量低，為提高EGFR突變基因檢出率，在臨床允許的情況下推薦增加血漿用量。抽血后延遲血漿分離會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞裂解，釋放出基因組DNA至血漿中；大量增加的基因組DNA會(huì)稀釋腫瘤來(lái)源的ctDNA，使得突變難以檢出。因此在標(biāo)本采集、運(yùn)輸及儲(chǔ)存過(guò)程中，防止游離DNA降解是首要考慮因素；其次，也應(yīng)防止血液中白細(xì)胞裂解，避免因野生型DNA增加導(dǎo)致ctDNA中EGFR突變基因無(wú)法檢測(cè)。
5.產(chǎn)品研發(fā)申報(bào)難點(diǎn)
人EGFR突變基因檢測(cè)試劑聯(lián)合治療產(chǎn)品，用于指導(dǎo)用藥或者預(yù)后判斷，該類產(chǎn)品屬于伴隨診斷產(chǎn)品，與治療藥物使用安全有效密切相關(guān)。美國(guó)FDA曾發(fā)布伴隨診斷產(chǎn)品指導(dǎo)文件，鼓勵(lì)申請(qǐng)人同步進(jìn)行治療產(chǎn)品與伴隨診斷產(chǎn)品研發(fā)與上市前申請(qǐng)。器審中心鼓勵(lì)申請(qǐng)人在伴隨診斷試劑研發(fā)時(shí)應(yīng)充分聯(lián)合治療藥物對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)。但國(guó)內(nèi)具體開(kāi)發(fā)創(chuàng)新性腫瘤個(gè)體化藥物的生產(chǎn)企業(yè)較少，目前多為國(guó)外專利期到期后腫瘤個(gè)體化藥物的仿制藥研究。這也給從事該類體外診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)開(kāi)展創(chuàng)新性腫瘤個(gè)體化伴隨臨床研究帶來(lái)困難。
來(lái)源：中國(guó)健康傳媒集團(tuán)-中國(guó)食品藥品網(wǎng)
